蓝莓叶多酚分离纯化、结构及抗氧化活性的研究

【摘要】蓝莓叶多酚具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、抗糖尿病、降血压、血脂等功能。在我国,对蓝莓叶多酚的研究报道和开发利用较少,蓝莓叶多作为废弃物处理,造成了资源的浪费。研究蓝莓叶多酚的提取纯化工艺,分析其组成对蓝莓叶原料的天然药物和功能性食品的研究开发有重要意义。本文以南京地区兔眼蓝莓叶为对象,进行了多酚的提取、纯化、分离、结构鉴定及体外抗氧化活性的研究和探讨,为实现蓝莓叶的综合利用提供理论依据。1.采用响应面法优化了蓝莓叶多酚的提取工艺,得到的最佳工艺为：乙醇浓度62.05%,提取温度67.54℃,料液比为1：23.65,提取时间为2.06h。在此条件下,提取率达到89.02%。同时建立了醇提蓝莓叶多酚的二次数学模型,对蓝莓叶多酚提取具有良好的预测作用。2.比较了八种大孔树脂对蓝莓叶多酚的静态吸附与解析性能。结果表明：HPD400大孔树脂最适合蓝莓叶多酚的纯化,当上样浓度为3mg/mL,pH为2,上样流速为2mL/min时,HPD400树脂对蓝莓叶多酚的吸附量较大,为140mL。用80mL40%乙醇以1mL/min的流速进行洗脱时,解析效果较好,解析率为90.50%,且峰形对称性较好,无明显的拖尾现象。经过HPD400树脂的纯化,蓝莓叶多酚的纯度由原来的38.75%提高到69.38%。3.采用采用高效液相色谱/二级阵列管/电喷雾电离源/串联质谱(HPLC-DAD-ESI-MStandem)对蓝莓叶多酚进行分析,结果表明,蓝莓叶多酚的主要组分为：低聚原花青素(A型原花青素二聚体,B型原花青素二聚体、三聚体)绿原酸及其衍生物(新绿原酸、隐绿原酸、二咖啡酰奎尼酸),槲皮素及其衍生物(芦丁、槲皮素-3-O-己糖苷、槲皮素-3-O-戊糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、槲皮素-3-O-(4”-3-羟基-3-甲基戊二)-鼠李糖苷),山奈酚及其衍生物(山奈酚-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-己糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖醛酸、山奈酚-(4”-3-羟基-3-甲基戊二)-鼠李糖苷),和两种对香豆酰奎尼酸。4.采用硅胶柱层析和葡聚糖凝胶SephadexLH20对大孔树脂纯化后的蓝莓叶多酚进行反复过柱分离,得到3个单体C1,C2,C3。采用质谱和核磁共振(1HHMR、13CHMR)鉴定为山奈酚、槲皮素和槲皮素-3-O-半乳糖苷(金丝桃苷)。5.采用体外实验综合评价了蓝莓叶各组分的ABTS自由基清除能力,DPPH自由基清除能力,羟自由基清除能力,超氧阴离子自由基清除能力,亚硝酸盐清除能力,还原力,FRAP值和ORAC值。结果证明蓝莓叶多酚有较强的抗氧化能力,经过大孔树脂的纯化,蓝莓叶多酚的抗氧化能力有显著的提高。另外,从蓝莓叶中分离得到的三种单体的抗氧化活性顺序为：槲皮素>山奈酚>金丝桃苷,三种单体的抗氧化活性均强于对照品rutin.蓝莓叶多酚各组分的抗氧化能力均较强,可用于开发天然抗氧化剂。
【作者】冯进；
【导师】李春阳；曾晓雄；
【作者基本信息】南京农业大学，发酵工程，2013，硕士
【关键词】蓝莓叶多酚；分离；纯化；结构；抗氧化活性；

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